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凝膠成像系統(tǒng)是分子生物學(xué)和生物化學(xué)實驗室的核心多功能成像平臺,其功能遠(yuǎn)不止于“拍攝凝膠照片"。它可以被視為一個集高靈敏度成像、精確光學(xué)控制和智能分析軟件于一體的工作站。
根據(jù)配置不同(光源、濾光片、相機類型),它能完成的任務(wù)非常廣泛,主要可以分為以下幾大類:
一、核心功能:電泳結(jié)果分析與記錄
這是傳統(tǒng)、基礎(chǔ)的應(yīng)用,用于對核酸或蛋白質(zhì)電泳后的凝膠進(jìn)行成像。
1、核酸凝膠(DNA/RNA):
瓊脂糖凝膠電泳:檢測PCR產(chǎn)物、酶切產(chǎn)物、DNA/RNA的質(zhì)量和濃度。通常使用溴化乙錠(EtBr)、GelRed/GelGreen 等熒光染料染色,在紫外透射光(UV) 下激發(fā)成像。
聚丙烯酰胺凝膠電泳:用于高分辨率分析小片段DNA、RNA或測序產(chǎn)物。
2、蛋白質(zhì)凝膠:
SDS-PAGE膠:檢測蛋白純度、分子量和粗略濃度。使用考馬斯亮藍(lán)、銀染 或熒光蛋白染料染色,分別在白光透射或特定熒光激發(fā)光下成像。
主要輸出:確認(rèn)實驗是否成功、評估樣品質(zhì)量、進(jìn)行粗略的分子量判斷和半定量比較。
二、高級功能:化學(xué)發(fā)光檢測
這是高靈敏度化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)的專長,也是其最重要的功能之一。
1、Western Blot(蛋白免疫印跡):這是最主要的應(yīng)用。檢測經(jīng)HRP或ALP標(biāo)記的二抗催化底物(如魯米諾)發(fā)出的光,從而對極微量(皮克級)的目標(biāo)蛋白進(jìn)行定性和精確定量。
2、其他基于膜的檢測:如Northern Blot、Southern Blot、EMSA(凝膠遷移或電泳遷移率實驗)的化學(xué)發(fā)光檢測。
3、報告基因檢測:如雙熒光素酶報告基因檢測。
主要輸出:實現(xiàn)極低豐度目標(biāo)分子的特異性檢測和數(shù)字化定量分析,獲得可發(fā)表級別的數(shù)據(jù)。
三、熒光檢測與多色熒光成像
配備多種激發(fā)光源和相應(yīng)發(fā)射濾光片的系統(tǒng),可以進(jìn)行復(fù)雜的熒光應(yīng)用。
1、熒光染料標(biāo)記的核酸/蛋白:使用如 SYBR系列、Cy系列 染料標(biāo)記的樣品,可以在特定波長光下獲得更高靈敏度和更佳信噪比的圖像。
2、多重檢測(Multiplexing):在一次實驗中同時檢測多個目標(biāo)。例如:
在Western Blot中,用不同熒光染料標(biāo)記的二抗(如IRDye 680, IRDye 800)同時檢測兩種不同分子量的蛋白。
在核酸凝膠中,同時使用不同顏色的分子量標(biāo)準(zhǔn)。
3、熒光蛋白觀察:如GFP、RFP等表達(dá)菌落或斑塊的初步觀察。
主要輸出:提高檢測靈敏度、實現(xiàn)實驗內(nèi)對照、節(jié)省樣品和時間。
四、普通成像與文檔記錄
許多系統(tǒng)也配備了白光光源(透射和反射),可用于:
1、菌落/噬菌斑計數(shù):對培養(yǎng)皿進(jìn)行拍照,并通過軟件自動或半自動計數(shù)。
2、染色后的組織切片、膜或宏陣列的文檔記錄。
3、普通標(biāo)本的拍照存檔。
五、一個*的附加功能:智能分析軟件
成像系統(tǒng)真正的價值有一半體現(xiàn)在其配套軟件上,它們能實現(xiàn):
1、條帶/點定量:自動識別條帶,計算光密度積分值,進(jìn)行分子量標(biāo)定、濃度計算。
2、相對定量:如Western Blot中目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白的比值分析。
3、分子量/等電點計算:通過與標(biāo)準(zhǔn)品對比,自動計算未知樣品的分子量或pI。
4、多通道圖像合并:將不同熒光通道的圖像疊加,直觀顯示共定位情況。
5、數(shù)據(jù)導(dǎo)出與報告生成:將定量數(shù)據(jù)導(dǎo)出為Excel格式,并生成分析報告。
總而言之,現(xiàn)代凝膠成像系統(tǒng)是一個高度集成的分析平臺,它從簡單的“照相"進(jìn)化到了對生命科學(xué)實驗中各種發(fā)光/發(fā)光信號進(jìn)行捕獲、量化、分析和管理的核心工具,極大地推動了研究的客觀性和效率。