賽默飛QuantStudio 6 Pro實時熒光定量PCR系統需要定期校準溫度。這是保證定量數據準確性和孔間一致性的必要維護操作。

一、為什么需要校準？

1、QuantStudio 6 Pro的溫控模塊（Peltier元件）長期使用后可能出現邊緣與中心的溫度偏差，導致不同孔的Ct值偏移、擴增效率不一致。

2、溫度不準會直接影響熔解曲線分析（Tm值漂移）和絕對定量結果。

3、要求：溫度校準通常每12個月一次，如果儀器使用頻繁（每天>2次）或環境溫度波動大，建議縮短至6-8個月。

二、校準內容包括什么？

QuantStudio 6 Pro的校準分為兩部分，溫度是其中之一：

1、溫度校準

目的：驗證并修正模塊各孔的實際溫度與設定值的偏差

所需工具：專用溫度校準板（含熱敏電阻或熒光溫度探針，貨號：4458936）

2、光學校準

目的：校正激發光/檢測光路（FAM, VIC, ROX, CY5等通道）

所需試劑：光學校準板（含6種染料，貨號：4458937）

三、校準操作方式

1、用戶自行校準（推薦有經驗者）

（1）從賽默飛下載QuantStudio 6 Pro校準套件（包括溫度校準板+軟件）。

（2）在儀器觸摸屏上進入 Maintenance → Perform Calibration → Temperature Verification。

（3）按向導放入專用板，運行約30分鐘，軟件自動生成偏差報告。若偏差超過±0.5℃，需要執行溫度校正（需輸入管理員密碼）。

（4）注意：溫度校正需要參考溫度計模塊（部分套件包含），否則只能驗證無法修正。

2、聯系工程師

（1）賽默飛提供年度預防性維護（PM），包含溫度+光學校準、系統檢測、清潔。價格約3000-5000元/次。

（2）如果自行校準失敗（如偏差>1.5℃），可能需更換加熱模塊，費用約1.2-1.8萬元。

四、如何判斷是否需要緊急校準？

出現以下現象時，即使未到周期也建議立即校準：

1、同一份樣本在不同孔位的Ct值差異 >0.5（正常應<0.25）。

2、熔解曲線的主峰Tm值偏移超過±1℃（例如陽性對照從85℃變成86.5℃）。

3、陰性對照出現非特異擴增（可能因孔間溫度不均導致引物二聚體）。

4、儀器自檢報錯：“Temperature uniformity out of spec"或“Block calibration required"。

五、實用建議

1、購買校準套件備用：如果實驗室有多臺QuantStudio系列（如3、5、6 Pro、7 Pro），可以共用一套校準板（貨號相同），單次成本約2500元。

2、記錄校準歷史：在儀器日志中記錄每次校準日期、偏差值、操作人。賽默飛軟件導出報告中包含校準數據。

3、日常驗證替代方法：若暫無校準條件，可使用第三方溫度驗證試劑盒（例如ROX染料標定法，如Thermo Scientific #4458941）快速判斷是否需要校準。

六、結論

1、定期校準，推薦每年一次。

2、高頻率使用或對定量精度要求高的實驗（如<1.5倍差異的基因表達），建議每6個月校準一次。

3、自行校準需購買專用套件并仔細閱讀手冊；否則直接聯系賽默飛售后服務。