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遇到BioRad Mini-PROTEAN Tetra(1658004)電泳儀在運行中電流突然下降,先別著急。這通常不是儀器損壞,而是電泳體系電阻突然增大導(dǎo)致的。在恒壓模式下,根據(jù)歐姆定律(I=U/R),電阻(R)增大,電流(I)自然會下降。
請按以下順序,從常見的原因開始排查:
一、立即檢查(安全起見,先暫停電泳)
1、觀察是否有氣泡斷開電路?
(1)現(xiàn)象:電極絲上或凝膠底部附著了大氣泡,特別是鉑金電極絲與緩沖液之間。
(2)對策:斷電后,輕敲電泳槽外壁,或用移液管吹出氣泡。如果是凝膠底部與下槽緩沖液之間有氣泡(跑一條帶后突然發(fā)生),說明玻璃板底部密封不嚴,內(nèi)槽緩沖液漏光,需要重新加滿內(nèi)槽液。
2、檢查緩沖液液面
(1)內(nèi)槽(陰極):液面必須淹沒短板玻璃的上沿。如果液面下降,說明內(nèi)槽漏液→補充緩沖液至正確刻度。
(2)外槽(陽極):液面是否過低?如果外槽液面低于玻璃板下沿,電路也不通。
3、檢查緩沖液狀態(tài)
(1)是否使用過多次? Tris-甘氨酸緩沖液一般跑3次左右即需更換。多次使用后離子耗盡,導(dǎo)電能力急劇下降→更換新鮮緩沖液(內(nèi)、外槽都換)。
(2)是否配錯或稀釋? 比如記成了5x或10x儲存液使用?→重新配制正確濃度的1x工作液。
二、如果以上都正常,檢查硬件
1、檢查電極插頭和導(dǎo)線
(1)紅黑插頭是否松動或氧化?插拔幾次,確保插入電源接口。
(2)電源線是否有折斷(尤其插頭根部)?可用萬用表測量通斷。
2、檢查鉑金電極絲
觀察電極芯(紅黑兩面的金屬絲)是否斷裂或嚴重腐蝕?如果斷了,需要更換電極芯組件(1658035/1658036)。
三、根據(jù)具體實驗情況判斷
1、如果是蛋白電泳,剛進入分離膠時:
這是正常現(xiàn)象!當樣品從濃縮膠(低pH,高Cl?)進入分離膠(高pH,低Cl?,甘氨酸根開始移動),電阻會生理性增大,電流會緩慢下降20-40%,然后穩(wěn)定。無需處理,繼續(xù)跑完即可。但如果下降超過80%(比如從150mA降到20mA),則按上述排查。
2、如果是核酸瓊脂糖凝膠電泳用此設(shè)備?(雖然不常見)
檢查TBE或TAE緩沖液濃度是否正確。如果用了去離子水,電流會為零。
四、現(xiàn)象 → 可能原因 → 解決方案
1、電流驟降為0或極低
原因:電路斷路
解決辦法:
(1)內(nèi)/外槽液面過低 → 加液
(2)電極插頭松動 → 插緊
(3)電極絲斷裂 → 更換
2、電流緩慢下降30-50%
原因:進入分離膠階段(正常)
解決辦法:無需處理,繼續(xù)運行
3、電流逐步下降至接近0
原因:緩沖液耗盡或稀釋
解決辦法:換新緩沖液
4、電流不穩(wěn)定,時有時無
原因:氣泡阻斷或接觸不良
解決辦法:排泡,清理插頭觸點
五、應(yīng)急處理流程
電流突然下降
暫停電泳 → 檢查:
1、內(nèi)槽液面? → 液面下降則補充
2、內(nèi)槽底部有無漏液? → 漏液則拆開重裝玻璃板(確保密封條干凈、無破損)
3、外槽液面? → 過低則補充
4、新舊緩沖液? → 舊液則更換
5、氣泡? → 排泡
6、插頭連接? → 重插
7、電極絲斷裂? → 更換電極芯