伯樂 GelDoc Go 凝膠成像系統出現化學發光信號弱或不出信號的問題，需要結合該機型的特點進行分析。GelDoc Go 是一款緊湊型、觸屏操作的成像儀，采用非制冷 CMOS 傳感器（不同于 ChemiDoc 系列的制冷 CCD），靈敏度和信噪比相對有限，更適用于強化學發光（如 ECL Plus、SuperSignal West Pico 等）或中等強度信號。以下是專門針對 GelDoc Go 的詳細排查指南。

一、確認基本的條件

1、成像模式是否正確

說明：在觸摸屏主頁選擇 “Chemi"（化學發光）模式，而不是“UV"或“White"。

2、樣品臺是否放置正確

說明：化學發光成像時必須使用黑色托盤（吸光、防止反光），不能放在 UV 透射臺或白光板上。

3、膜是否朝上

說明：確保蛋白面朝上（與發光底物接觸的一面朝向鏡頭），否則信號會被膜本身阻擋。

4、是否加足了發光底物

說明：底物必須均勻覆蓋膜表面，且孵育時間足夠（通常 1-2 分鐘）。

5、曝光時間是否足夠

說明： GelDoc Go 自動曝光可能因信號太弱而提前終止。建議手動設置長曝光（如 30 秒→2 分鐘→5 分鐘）。

二、按可能性排序的逐步排查

A、Step 1：使用陽性對照驗證儀器功能

這是快速判斷儀器是否正常的方法。

1、取一張用過的新膜（或濾紙），滴加 1-2 μL 稀釋的發光底物混合液（不加任何蛋白），直接放入暗箱用 Chemi 模式曝光 1 分鐘。

2、結果判斷：

能看到明顯白斑 → 儀器硬件正常，問題在樣品處理或試劑。

仍然無信號 → 可能是儀器光電系統故障或設置問題，繼續下一步。

B、Step 2：檢查曝光設置（GelDoc Go 關鍵點）

GelDoc Go 的 CMOS 傳感器無制冷，長時間曝光（>1 分鐘）會產生大量熱噪聲，但微弱信號仍需長曝光。

1、在成像界面點擊 “Manual"，依次嘗試：

曝光時間：30 秒（較強信號）、2 分鐘（中等）、5 分鐘（極弱信號）。

像素合并（Binning）：選擇 2×2 或 4×4（顯著提升靈敏度，但分辨率下降）。

增益（Gain）：可設為“高"或手動提高（會增加噪點）。

2、保存一張 “暗場（Dark）" 參考圖（關閉光源、蓋上鏡頭蓋）用于后續扣除背景。

C、Step 3：確認樣品制備與試劑

1、蛋白上樣量

原因：每孔上樣量<1 μg（對于普通目標蛋白）

解決：上樣 20-50 μg 全細胞裂解液，或使用過表達陽性對照。

2、轉膜效率

原因：大分子蛋白轉印不充分，或膜選錯（NC 膜與 PVDF 結合能力不同）

解決：用麗春紅染色確認轉印效果。PVDF 需甲醇激活。

3、抗體濃度

原因：一抗/二抗稀釋比例過高或孵育時間不足

解決：按說明書推薦下限濃度，4℃ 孵育過夜。

4、發光底物

原因：底物失效（過期或反復凍融），或敏感度不足（如 ECL vs ECL Plus）

解決：更換新鮮高靈敏度底物（如 SuperSignal West Femto）。GelDoc Go 建議使用 增強型化學發光底物。

5、膜干燥不均

原因：膜上殘留過多底物液體，或局部干燥形成結晶

解決：吸去多余液體，保持濕潤但無自由流動液體。

D、Step 4：清潔光學路徑（GelDoc Go）

GelDoc Go 的鏡頭和內部保護窗非常容易積灰，且沒有平場校正功能（不同于 ChemiDoc 系列）。

1、關閉電源，用氣吹吹掉鏡頭表面的灰塵。

2、用無水乙醇潤濕的無塵擦鏡紙輕輕擦拭鏡頭前端（圓形玻璃）。

3、打開暗箱，取下黑色托盤，用擦鏡紙清潔暗箱頂部內側的玻璃窗（鏡頭正對的位置）。

4、注意：不要在鏡頭上留下纖維或劃痕。

E、Step 5：檢查固件版本與恢復出廠設置

1、在觸摸屏進入 設置 → 關于，檢查固件版本（新版本可從 Bio-Rad 下載）。

2、如果之前做過異常設置，可嘗試 恢復出廠設置（設置 → 維護 → 恢復默認）。

F、Step 6：硬件故障判斷

1、如果以上全部無效，且陽性對照也無信號，可能硬件損壞：

2、CMOS 傳感器失效（如無響應）。

3、電路板或鏡頭快門卡死（聽不到快門開關聲）。

三、GelDoc Go 化學發光成像的典型設置參考

1、曝光模式

建議值：手動

2、曝光時間

建議值：2-5分鐘

3、Binning

建議值：4×4

4、模擬增益

建議值：高（或 3×）

5、成像后處理

建議值：使用“增強對比度"或手動調節亮度和 gamma

四、總結：GelDoc Go 化學發光信號弱的最常見原因

1、未選擇化學發光模式 或 未使用黑色托盤。

2、自動曝光過早結束 – 必須使用手動長曝光（2-5 分鐘）+ 4×4 binning。

3、發光底物靈敏度不足 – GelDoc Go 對 ECL 不敏感，需使用 ECL Plus 或更高靈敏度底物。

4、樣品蛋白量太低 – 建議 20-50 μg/孔，并確認轉膜有效。

5、鏡頭或保護玻璃臟污 – 清潔后信號可提升 2-3 倍。