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在樣品中混入磁珠(Magnetic Beads)或微載(Microcarriers),確實會對Countess 3系列細胞計數儀的準確性和結果造成嚴重干擾。主要影響有二:一是儀器會將磁珠誤判為細胞,導致計數結果虛高;二是儀器在識別包裹在微載體上的細胞時會出現困難,并可能將微載體碎片誤判為細胞。
你的Countess 3具體是明場(Brightfield) 還是FL(熒光)型號?這決定了接下來的操作策略:
明場 (Countess 3):主要通過優化硬件設置來解決,例如使用門控功能(調整閾值)來排除干擾。
FL型號 (Countess 3 FL):除了可用的硬件設置,還可以借助熒光模式來選擇性計數,能有效識別并區分。
一、解決方案:明場 (Countess 3)
即使是基礎的明場型號,也提供了應對方法:
1、調整“門控"(Gate)設置:這是核心方法。Countess 3的機器學習算法支持根據尺寸(Size)、亮度(Brightness)和圓度(Circularity) 等物理參數圈定目標。通過在“Edit Protocol"界面中移動滑塊,可以收緊閾值,過濾掉不符合細胞特征的顆粒。
2、稀釋或沉淀分離:如果磁珠/微載體尺寸與細胞差距很大,可以嘗試對樣品進行稀釋,或利用重力/磁力使顆粒短暫沉淀,取上清液計數,以物理方式降低干擾。
二、解決方案:熒光 (Countess 3 FL)
這是更高級且推薦的解決方案,尤其適用于FL型號:
1、使用熒光染料標記:這是鑒別不同顆粒的黃金標準。例如,用FDA或Calcein-AM染活細胞,用PI染死細胞。熒光染料會使細胞發出特定波長光,而有背景熒光干擾的磁珠不會發光,從而被濾除。
2、明場+熒光雙重計數:這是FL型號的核心優勢,它支持分析多個通道(明場+2個熒光通道),你可以通過對比,精準識別并排除非目標顆粒。
三、總結與操作建議
這是根據你儀器型號的不同情況給出的核心策略:
1、在明場(Countess 3)中:優先使用 “門控"功能調整參數。如果干擾顆粒尺寸與細胞明顯不同,可以通過物理方法分離。
2、在FL型號(Countess 3 FL)中:直接使用熒光染料標記配合熒光成像模式,這是最干凈、高效的解決方案。
需要注意的是,無論采用何種方法,都建議在正式實驗前進行預實驗,驗證門控參數或熒光染料的效果,并仔細檢查儀器捕獲的圖像,確認細胞被正確標記而非干擾顆粒。