Bio-Rad Trans-Blot Turbo (1704150) 蛋白轉印系統中緩沖液的反復使用，需要明確一點：該系統設計上是一次性使用 —— 其核心耗材是封閉式轉印包（內含專用海綿、濾紙和緩沖液）。強烈不建議將使用過的轉印包或自行配制的緩沖液重復使用。

不過很多實驗室為降低成本，會嘗試自己配制緩沖液并重復利用。下面從科學原理、風險及可行操作三個層面說明。

一、為什么說“不能反復使用"？

1、緩沖液成分不穩定：Trans-Blot Turbo 緩沖液是低離子強度（電導率~1.2 mS/cm）的專用配方。在轉印過程中，電場會引發：

（1）電解：正負極產生氣體，消耗水分，改變離子濃度和 pH。

（2）雜質積累：凝膠中的 SDS、Tris、甘氨酸以及樣品中的鹽分、蛋白會進入緩沖液，使電導率升高。

（3）緩沖能力下降：反復使用后，pH 偏移，轉印效率（尤其大分子蛋白）明顯降低。

2、儀器安全風險：重復使用后離子強度過高 → 易觸發 “High Load"（過載）報警，電流飆升可能損壞電源板；如果離子強度過低（如過度稀釋或消耗），又可能報 “No Load"。

3、轉印效果不可靠：多次使用會導致條帶模糊、拖尾、甚至反轉（蛋白穿過濾膜）。定量實驗（如WB）不可重復。

二、如果想省錢，是否有辦法有限重復使用？

某些實驗室會自行配制 Trans-Blot Turbo 兼容緩沖液（不使用一次性轉印包），然后用自制海綿/濾紙組裝，并嘗試重復使用緩沖液。注意這屬于“非標準操作"，可能違反儀器保修條款，但技術上可嘗試以下做法：

1、自制緩沖液配方（參考）

（1）陽極緩沖液：25 mM Tris，192 mM 甘氨酸，pH 8.3（不含 SDS；也可用低濃度 SDS 如 0.01%）

（2）陰極緩沖液：25 mM Tris，192 mM 甘氨酸，0.1% SDS，pH 8.3

（3）電導率 應在 1.0-1.5 mS/cm 之間（用導電率計測量）。

2、重復使用次數建議

（1）多 2-3 次，且僅適用于相同實驗、相同凝膠類型。

（2）每次使用后必須測量電導率和 pH：

電導率 > 2.0 mS/cm → 棄用（易 High Load）。

電導率 < 0.8 mS/cm → 棄用（效率太低，可能 No Load）。

pH 變化超過 ±0.5 單位 → 棄用。

（3）補充調節：如果電導率略高，可加去離子水稀釋；若略低，可補加少量 10× 濃縮原液（但很難調準）。

3、使用后處理

（1）收集緩沖液，離心去沉淀（蛋白/碎屑），0.45 μm 濾膜過濾。

（2）儲存在 4°C，不超過 1 周，因為細菌生長會改變離子強度。

（3）每次使用前新鮮混合陽極液和陰極液（不要混在一起存放）。

三、更推薦的省錢替代方案：不用重復使用緩沖液，而是換用其他耗材

1、購買伯樂原裝“散裝轉印包"：有 10 包或 100 包的大包裝，單次成本比小包裝低。

2、使用第三方的兼容轉印包（如 Thermo Pierce Power Blotter 系列，需確認尺寸和電阻匹配，有一定風險）。

3、回歸傳統濕轉：對于非緊急、低豐度蛋白，濕轉過夜雖慢，但緩沖液可重復使用 3-5 次（傳統 Towbin 緩沖液成本極低）。

四、總結建議

1、追求結果可靠、儀器安全

做法：不重復使用。用原裝轉印包或每天新鮮配制專用緩沖液。

2、預實驗/半定量摸索

做法：可嘗試自制緩沖液并重復使用 ≤2 次，但每次測電導率，并密切監視儀器是否報警。

3、實驗室常規WB定量

做法：不要冒風險。重復使用導致的條帶差異會毀掉數據可重復性。

4、已出現“High Load"報警

做法：立即停用重復使用的緩沖液，清洗卡盒，換全新緩沖液。

一句話總結：Trans-Blot Turbo 系統不支持反復使用緩沖液，設計為一次性。強行重復使用極易導致離子強度異常 → 損壞儀器或結果不可靠。如果必須節省成本，請選擇自制新鮮緩沖液（當天用當天配），最多用 2 次并嚴格監測電導率。